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本片是12年前《怪獸電力公司》的前傳，大眼仔是怪獸世界的首席諧星，毛怪還沒成為第一的嚇人怪物前，兩人從原本是競爭對手最後變成親密好友的過程。片中千奇百怪的怪獸輪番登場，可愛吸睛，毫無冷場。 在怪獸電力公司中，業績最好的毛怪與搭檔大眼仔也曾有輕狂的少年時期。這對絕佳拍檔第一次見到彼此，是當年剛進入「怪獸大學」的時候。每個怪獸並不是天生就會嚇人，他們也需要上大學進修，才能掌握嚇人技巧，而「怪獸大學」就是在怪獸世界中一所培育嚇人技巧的最高學府，當時的大眼仔是個還戴著牙套的書呆子，而毛怪則是在校的風雲人物，兩人碰巧成為同寢室的室友，但一開始這對歡喜冤家完全不能忍受彼此。但隨著兩人的相處與摩合，卻變成緊密不分的好友......

當資深喜劇作家查理·伯恩斯（Charlie Burnz）遇見紐約街頭歌手艾瑪·佩奇（Emma Payge）時，他們形成了一種不太可能但又熱鬧而感人的友誼，這消除了代溝，並重新定義了愛與信任的含義。